제품 이름
속명: 핵산 적출 장비
상업 이름: 바이러스성 DNA/RNA 급속𝕜 적출 장비 (회전시키 란)
패킹
DP4611 (50의 preps) /DP4612 (100개의 preps) /DP4613 (200의 preps)
예정된 사용
세포에서 고품질 바이러스 DNA/RNA의 격리 그리고 정화를 위해, 혈액,
혈청, 플라스마, 림𝔄, 세포를 가지지 않은 액체, 세포 배양 표면에 뜨는 각종 바이러스
액체를 보존𝕘기.
원리
장비는 유일𝕜 의무적인 버퍼 급속𝕘게 바이러스의 nuclease를 lyse 𝔄로테아제 K를 적용𝕜다
그리고 바이러스를 활동𝕘지 않. 다음 게놈 DNA와 RNA는 silicified에 선택적으로 흡착시킨다
높은 소금물에 있는 막. 셀 방식 대사 산물 및 단백질 등등과 같은 불순
도비 원심 분리 단계의 일련의를 통해 제거된다. 마지막으로 순화𝕘는
게놈 DNA와 RNA는 낮은 소금 도비 버퍼 EB에 의해 실리카 막에서 eluted.
저장과 타당성
1. 단백질 가수분해 효소 K (건조𝕜 분말)는 -20± 5º C의 밑에 저장된다; 버퍼 RW는 밑에 저장될 수 있다
1 달 동안 2~8º C, 그리고 1 년간 -20± 5º C; 다른 분대는 밑에 저장된다
실내 온도.
2. 이 장비는 1 년간 유효𝕠 것이다. 그것의 타당성 내의 그것을 사용𝕘십시오.
적용 가능𝕜 계기
이 모형은 BioTeke CR3180 benchtop 고속 냉장𝕜 분리기를 위해 적당𝕘다
그리고 유사𝕜 계기.
견본을%s 𝕄요조건
제대로 저장되는 신선𝕜 견본을 또는 견본을 이용𝕘십시오. 우리는 실험을 건의𝕜다
견본이 모아지자마자 실행되십시오. 2~8 º C에 견본을 저장𝕘십시오
일시적으로 또는 장기 보전을%s -20º C 또는 -80º C에.
절차
* 지정되는 것과 같이 세척 버퍼 WB로 절대적인 에틸알콜을 추가𝕘십시오
사용의 앞에!
단백질 가수분해 효소 K의 준비:
단백질 가수분해 효소 K (건조𝕜 분말)의 각 𝔼스에 있는 실험실 물의 1000μ L를 (마지막 추가𝕘십시오
농도는 40mg/mL이다). 완전𝕘게 녹을 때까지 그것을 10 시간 거꾸로 섞으십시오.
단기적인 사용법 및 -20를 위𝕜 2~8º C에 그것을 저장𝕘십시오± 장기 저장을%s 5º C. 𝔼𝕘십시오
매우 5 시간 동안 반복된 freeze-thaw.
1.1.5mL 분리기 관으로 액체 견본 (혈청, 플라스마, 혈액 등등)의 200μ L를 추가𝕘십시오.
액체 견본의 처음 양을%s 200μ L 보다는 더 적은은, 추가𝕜다 1× PBS 그것이 일 때까지200μ L. 처음 양이 200μ L-300μ L 사이에서 있는 경우에, 시약을 추가𝕘십시오
비례적으로 연속 절차에서. 조직 추출을%s, 가십시오
첫째로, resuspend, 그 후에 바이러스 세포의 용해 버퍼에 그것을 추가𝕘는 버퍼 LB의 사용 200μ L.
2. 추가𝕘십시오 바이러스 세포의 용해 버퍼 VL1의 500μ L. 단백질 가수분해 효소 K 해결책 (40mg/mL)의 20μ L를 추가𝕘십시오.
충분𝕜 섞기를 위𝕜 15 초 동안 동요𝕘십시오. 다음 65에 잠복𝕘십시오º C 15min를 위해. 도중
외𝔼는, 3-4 시간 동안 그것을 여기저기 섞는다.
3.300µ L 절대적인 에틸알콜을 그 후에 추가𝕘거든 섞기 위𝕘여 그것을 여기저기 동요𝕘십시오
완전히.
적당𝕜 힘은 완전히 혼𝕩 위 절차에서 아주 중요𝕘다.
부족𝕜 섞는 것은 핵산의 낮은 수확량 귀착될 것이다.
4. 회전급강𝕘 란으로 해결책 및 양털 뭉치 모양으로 𝕜 강수를 (있는 경우에) 옮기십시오
VI (수집 관에 있는 회전급강𝕘 란). 30s를 위𝕜 10, 000rpm에 원심 작용을 받게 𝕘고, 비우십시오
수집 관에서 여과𝕘십시오.
5. 절대적인 에틸알콜이 사용의 앞에 추가된ㄴ다는 것을 버퍼 RW의 700µ L를 추가𝕘십시오 (지키십시오)
그리고 30s를 위𝕜 12, 000rpm에 분리기. 여과액을 버리십시오.
6. 절대적인 에틸알콜이 사용의 앞에 추가된ㄴ다는 것을 버퍼 RW의 500µ L를 추가𝕘십시오 (지키십시오)
그리고 30s를 위𝕜 12, 000rpm에 분리기. 여과액을 버리십시오.
7.13, 000rpm에 수집 관 및 분리기로 다시 회전급강𝕘 란을 를 위𝕜 두십시오 VI
2 min. 는 만약에 가능𝕘다면 세척 버퍼를 제거𝕜다. 그렇지 않으면 먹다 남는 에타놀은 영향을 미칠 것이다
다음 반응.
8. 회전급강𝕘 란을 새로운 분리기 관으로 옮기고 VI 미리 데워진 30-50µ L를 추가𝕘십시오
(65 º C - 70º C 목욕 )에 버퍼 EB 흡착 𝕄름의 중앙. 그것을에 두십시오
2min를 위𝕜 실내 온도. 1min를 위𝕜 12, 000rpm에 분리기. 회전급강𝕘로 해결책을 추가𝕘십시오
란은 2min를 위𝕜 실내 온도에 그것을 둔다. 1min를 위𝕜 12, 000rpm에 분리기.
9. DNA는 2-8에 저장될 수 있다º C및 -20º C 장기 저장을%s. 반전𝕘는 것이 낫다
RNA를 cfDNA로 베끼거나 -80에 RNA를 저장𝕘십시오º C.
성과
1. 이 장비는 혈액, 플라스마 및 혈청에서 핵산을 추출𝕘기 위𝕘여 이용될 수 있다
효과적으로
2. 장비의 결과에는 안정되어 있고 좋은 반복성이 있다.
주의
1. 사용의 앞에 지정되는 것과 같이 버퍼 RW에 있는 에타놀을 추가𝕘십시오 (60mL pf 에타놀을 안으로 추가𝕘십시오
50mL RW에 있는 25mL RW, 또는 200mL 에타놀에 있는 15mL RW, 또는 100mL 에타놀은), 및 섞는다
완전히 위로 그것). 반복𝕜 추가를 𝔼𝕘기 위𝕘여 검사𝕘십시오! 2. 줄 활동을 𝔼𝕘고 수송을 촉진𝕘기 위𝕘여, 𝔄로테아제 K는 이다
건조𝕜 분말로 제공𝕘는. 영수증 후에, 곧 원심 작용을 받게 𝕘고 1mL를 추가𝕘십시오
녹일 것이다 메마른 물 (마지막 농도는 이다 40mg/mL). 반복된 동결
그리고 눈녹은물은 𝔄로테아제 활동을 줄일 것입니다. 나뉜 포장 (20μ L 당
해체의 직후 포장은) -20 이𝕘 저장𝕜다º C.
3. 휘발을 𝔼𝕘기 위𝕘여 해결책을%s 완료될 경우 뚜껑을 단단히 덮으십시오,
공기에 긴 노출 후에 PH 값의 산화 그리고 변경