Amiz용 ELISA 테스트 키트

• Environmental Protection: Yes
• Certification: REACH
• Color: White
• Classification: Food Diagnostic
• Function: Food Testing
• 모델 번호.: KA00202H
• 세관코드: 38229000

제품 설명

제품 설명

경쟁 효소인 면역분석 키트
Furaltadone 대사물의 정량적 분석(Amoz)
 

 

1. 배경

니트로푸란스는 뛰어난 항균 및 약동학 특성을 가진 동물 생산에 자주 사용되는 합성 광범위 항생제입니다. 1993년 EU에서 퓨랄타돈, 니트로푸란토인, 니트로푸라존 등의 니트로푸랑산 약물은 식용 동물 생산에서 사용이 금지되었으며 1995년에는 푸라졸리돈 사용이 금지되었습니다.
모제 약물이 매우 빠르게 대사되고 조직이 결합된 질소산 대사물이 장기간 보존되므로 니트로푸란 잔류 물질 분석은 니트로푸란 모제 조직의 조직 결합 대사물 검출에 기반해야 합니다. 따라서 대사물은 니트로퓨란 남용 검출 시 표적으로 사용됩니다.  Furazolidone 대사물(AOZ), Furaltadone 대사물(Amiz), Nitrofurantoin 대사물(AHD) 및 Nitrofurazone 대사물(SEM).
Amez-residues 는 LC-MS 또는 LC-MS/MS에 의해 가장 흔히 확인됩니다. 크로마토그래피 방법과 비교했을 때 효소 면역분석법은 감도, 검출 한계, 기술 장비 및 시간 요건과 관련하여 상당한 이점을 보여줍니다.  

1. 테스트 원리

이 ELISA 키트는   간접 경쟁효소면역분석법의 원리에 따라 Amoz를 검출하도록 설계되었습니다 . 마이크로티터 웰은 캡처 BSA 결합 항원으로 코팅되어 있습니다. 시료의 Amez 는 추가된 항체에 대해 마이크로티터 플레이트에 코팅된 항원과 경쟁합니다.  효소 콘주게이트 추가 후 발색체 기질이 사용되며 분광광도계로 신호를 측정합니다. 흡수는 시료의 Amoz 농도에 반비례합니다.

1. 응용 프로그램

이 키트는  꿀에 있는 Amez 잔류물의 정량 및 정성적 분석에 사용할 수 있습니다 .

1. 교차 반응

Furaltadone 대사물(Amez)............ 100%
Furazolidone 대사물(AOZ)................................ 0.1% 미만
니트로푸란토인 대사물(AHD)............ 0.1% 미만
니트로푸라존 대사물(SEM)...... ...……0.1% 미만
퍼랄타도네................................................ 11.1%
후라졸리돈................................................................ ....... < 0.1%
니트로푸란토인............................................................................ 1% 미만
니트로푸라존................................................................ 1% 미만

1. 필요한 자료
   1. 장비

--- 마이크로티터 플레이트 분광광도계(450nm/630nm)
---- 로터리 증발기 또는 질소 건조 기기
---- Homogenizer /stomacher
- - - - 셰이커
보텍스 믹서
원심분리기
분석 균형(인덕턴스: 0.01g)
---- 눈금 피펫: 10ml
고무 피펫 전구
---- 용적 플라스크: 100ml, 1L
유리 플라스크: 10ml
--- 폴리스티렌 원심분리 튜브: 2mL, 50ml
유리 원심분리기 튜브: 10ml
--- 마이크로피펫:  20ul-200uL, 100uL-1000ul,
250uL- 멀티피펫

1. 1. 시약

에틸 아세테이트(AR)
---- 메탄올(AR)
-- n-hexane(또는 n-heptane)(AR)
---- 인산인산디칼륨 삼수화물
(K2HPO4.3H2O) (AR)
--- 농축산염산 (HCl, AR)
-- 수산화나트륨(NaOH, AR)
탈염수

1. 키트 구성 요소

1. 항원으로 코팅된 96개의 웰이 있는 마이크로티터 플레이트
2. 표준 용액(6병)

0ppb,  0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb

1. 표준 용액:  (1ml/병)... 100ppb
2. 효소 콘주게이트 12ml.............적색 뚜껑
3. 항체 용액 7ml...................녹색 뚜껑
4. 용액 7ml................................ 화이트 캡
5. 용액 B 7ml................ 빨간색 뚜껑
6. 용액 7ml를 중단하십시오................ 노란색 뚜껑
7. 20 × 농축 세척액 40ml

투명 캡

1. 2 × 농축 추출 용액 50ml

.......................…. 블루 캡

1. 니트로벤젠알데히드 15.1mg.......블랙 캡

1. 시약 준비

해결책  1: 유도 시약:
2 -니트로벤제알데히드가 든 병에 메탄올을 첨가하고 10ml로 희석합니다. (10mm의 농도에서)
솔루션  2: 0.1M K2HPO4:  
22.8g   K2HPO4.3H2O의 무게를 지탱하고 탈이온수로 1L까지 용해합니다.  
솔루션  3:1M HCl:
8.3ml의 농축 염산을 옮겨 탈염수로 100ml로 희석합니다.
솔루션  4:1M NaOH:
수산화나트륨 4.0g을 계량하고 탈이온수로 용해하여 100ml로 희석합니다.
솔루션 5: 추출 솔루션
탈이온수로 2 × 농축 추출 용액을 1:1의 용량 비율로 희석합니다. 이 용액은 4ºC에서 1개월 동안 보존될 수 있습니다.
해결책 6: 세척액:
20 × 농축 세척액을 탈이온수로 희석하여 플레이트를 세척하는 데 사용되는 1:19의 부피 비율로 희석합니다. 이 희석된 용액은 4ºC에서 1개월 동안 사용할 수 있습니다.

1. 시료 준비
   1. 작동 전 주의 사항 및 주의 사항:

(A) 실험 과정에서 원오프 팁을 사용하고 다른 시약을 흡수할 때 팁을 변경하십시오.
(b) 모든 실험 기기가 깨끗한지 확인합니다.
(c) 2차 시약은 반년 동안 2-8ºC에서 보존될 수 있습니다.
(d) K2HPO4 용액은   3°C에서 2-8ºC로 저장할 수 있습니다  개월
(e) HCl 용액은  3개월 동안 실온에서 보관할 수 있습니다.
(f) NaOH 용액은  실온에서 3개월 동안 보관할 수 있습니다.
(g) 치료되지 않은 검체는 냉동 상태로 보관합니다.
(h) 처리된 검체는  어둠 속에서 2-8ºC에서 24시간 동안 보관할 수 있습니다.
8.2 꿀:
(---) 50  ml 폴리스티렌 원심분리 튜브에 꿀 1.0 ± 0.05g의 시료를 넣고 4mL 탈이온수, 0.5ml 1M HCl(용액 3) 및 100ml 미분 시약(용액 1)을 첨가한 후 2분 동안 완전히 흔듭니다.
(----  37°C에서 야간(약 16시간) 배양
-- 5ml 0.1M K2HPO4( 용액 2),  0.4ml 1M NaOH (용액 4) 및 5ml 에틸 아세테이트를 30초간 격렬하게 흔듭니다.  
-- -실온에서(20-25ºC) 최소 3000g로 10분 동안 원심분리합니다.
--- 50oC 질소 가스 또는 회전식 증발기로 건조된 2.5ml의 상청액 유기상을 10ml 깨끗한 유리 튜브에 옮겨 담습니다.
남은 마른 재료를 1ml n-hexane(또는 n- hepane)로, 30초간 보텍스한 다음 1ml 추출 용액(용액 5)을 첨가하고 1분 동안 보텍스하여 완전히 혼합합니다.
--- 실온에서(20-25oC) 최소 3000g로 5분간 원심분리합니다.
----상청액 유기상을 제거하고 분석을 위해 기질 수상을 50ml씩 섭취합니다.

1. 분석 프로세스
   1. 분석 전 주의 사항:

9.1.1 모든 시약과 마이크로웰이 모두 실온(20-25ºC)에 있는지 확인하십시오.
9.1.2 사용 후 즉시 모든 REST 시약을 2-8ºC로 되돌립니다.
9.1.3 마이크로웰을 정확하게 세척하는 것은 분석 과정에서 중요한 단계입니다. 이는 ELISA 분석의 재현성에 중요한 요소입니다.
9.1.4 배양 중 빛을 피하고 마이크로웰을 덮으십시오.
9.2 분석 단계:
9.2.1 모든 시약을 실온에서(20-25ºC) 30분 이상 빼내고 사용 전에 부드럽게 흔듭니다.
9.2.2 전자레인지에서 데우는 데 필요한 전자레인지를 꺼내 놓고 나머지는 즉시 2-8ºC의 지퍼백에 넣어 주십시오 .
9.2.3 희석된 세척액을 사용하기 전에 실온에 두어야 합니다.
9.2.4 숫자: 모든 마이크로웰 위치에 번호가 매겨지며 모든 표준 및 샘플은 중복해서 실행해야 합니다. 표준 및 샘플 위치를 기록합니다.
9.2.5  표준 용액/시료 및 항체 용액 추가: 50µL의 표준 용액 또는 준비된 샘플을 해당 웰에 추가하고 50µl 항체 용액을 추가합니다.  플레이트를 수동으로 흔들어서 부드럽게 혼합한 다음 덮개를 씌운 상태에서 25°C에서 30분 동안 배양합니다.
9.2.6  세척: 뚜껑을 부드럽게 제거하고 우물에서 액체를 부은 다음 4 -5회 10초 간격으로 250µl 희석 세척액(용액 6)으로 마이크로웰을 헹구십시오. 흡수제로 잔류 물을 흡수합니다(사용하지 않은 팁으로 남은 공기 방울을 제거할 수 있음).
9.2.7 효소 콘주게이트 추가:  효소 콘주게이트 100ml를 각 웰에 추가하고 부드럽게 혼합하고 어두운 곳에서는 섭씨 25도에서 30분간 커버 를 사용하여 배양한 후, 세척 단계를 벗어서 반복합니다.
9.2.8 컬러: 각 웰에 50µl 용액 A와 50µl 용액 B를 추가합니다. 플레이트를 수동으로 흔들어주어 부드럽게 혼합한 후 커버가 있는 25ºC에서 15분 동안 배양합니다(12.8 참조).
9.2.9  측정: 각 웰에 50µL의 정지 용액을 추가합니다. 플레이트를 수동으로 흔들어주어 부드럽게 혼합하고 450nm에서 흡광도를 측정합니다(450/630nm의 듀얼 파장으로 측정할 것을 권장합니다. STOP 용액을 추가한 후 5분 내에 결과를 읽으십시오.)

1. 결과
   1. 흡수율

표준물질과 시료에 대해 얻은 흡수율 값의 평균값을 첫 번째 표준(표준 영점)의 흡수율 값으로 나눈 다음 100%를 곱합니다. 따라서 0 표준은 100%와 동일하며 흡수율 값은 백분율로 표시됩니다.
   
B--흡광도 표준(또는 샘플)
B0 -흡광도 제로 표준

1. 1.  표준 곡선

표준 곡선을 그리려면 표준물질의 흡수율 값을 y축으로, Amoz 표준용액(ppb)의 농도에 대한 반로그값을 x축으로 취합니다.
보정 곡선에서 판독할 수 있는 각 샘플의 Amiz 농도(ppb)에 각 샘플의 해당 희석 계수를 곱하고 실제 시료 농도를 구합니다.
주의 사항:
   특별 소프트웨어는 요청에 따라 제공될 수 있는 모든 데이터 분석을 위해 개발되었습니다.  
시료의 희석 비율: 2.

1. 감도, 정확도 및 정밀도

감도:  0.1ppb
검출 한계....................... ..... 0.2ppb.
정확성............................ 90 ± 20%
정밀도:  ELISA 키트의 CV가 10% 미만입니다.

1. 주의

12.1 표준값과 표본의 흡수율 평균값은 시약과 표본이 실온(20-25ºC)으로 조절되지 않으면 감소합니다.
12.2 재현성에 실패하지 않도록 마이크로웰을 말려서 단계를 진행하면 마이크로웰스 거치대를 누른 후 즉시 다음 단계를 밟을 수 있습니다.
12.3   . 사용하기 전에 각 시약을 부드럽게 흔듭니다.
12.4.2M H2SO4 솔루션으로 피부 관리제 기능을 중단하십시오.
12.5 키트를 사용하지 마십시오. 다른 배치의 시약을 교환하지 마십시오. 그렇지 않으면 감도가 떨어집니다.
12.6 ELISA 키트를 2-8ºC에서 보관하십시오. 얼지 마십시오. 전자렌지에 있는 접시를 밀봉하고 모든 배양 과정 동안 직사 광선이 내리쬐지 않도록 합니다. 마이크로티터 판을 덮는 것이 좋습니다.
12.7 기판 용액이 색상을 바꿔도 버려져야 합니다.    0 표준값의 흡광도 값(450/630nm) 이 0.5(A450nm < 0.5)보다 작으면 시약이 악화될 수 있습니다.
12.8 색조 반응은 용액 A와 용액 B를 추가한 후 10-15분 후에 필요합니다. 그러나 색조가 너무 밝아서 확인할 수 없는 경우 배양 시간을 20분 이상으로 연장할 수 있지만,  반대로 25분을 초과하지 않아야 합니다. 배양 시간을 적절하게 단축해야 합니다.
12.9 최적의 반응 온도는 25ºC입니다. 온도가 높거나 낮으면 감도와 흡광도 값이 변경됩니다.

1. 보관 조건 및 보관 기간

     보관 조건: 2-8ºC
보관 기간: 12개월

상세 사진

 

 

회사 프로필